보완 의존성 세포독성

Complement-dependent cytotoxicity

보완 의존성 세포독성(CDC)은 IgG와 IgM 항체의 이펙터 기능이다.대상 세포(예: 박테리아나 바이러스 감염 세포)의 표면 항원에 결합할 때, 단백질 C1q를 이들 항체에 결합함으로써 고전적인 보완 경로가 촉발되어 막 공격 복합체(MAC)와 표적 세포 투석체가 형성된다.

보완 시스템은 IgG1, IgG3 및 IgM 항체에 의해 약하게, IgG2 항체에 의해 효율적으로 활성화되며 IgG4 항체에 의해 활성화되지 않는다.[1]

그것은 치료용[2] 항체나 항체[3] 파편이 항균 효과를 얻을 수 있는 작용의 한 메커니즘이다.[4][5]

CDC 검사 사용

치료항체

항균 치료 항체의 개발은 표적 세포를 죽이기 위해 CDC를 트리거하는 능력을 포함한 그들의 이펙터 기능의 체외 분석을 포함한다.고전적 접근법은 표적 세포와 보완원(세럼)으로 항체를 배양하는 것이다.그런 다음 다음과 같은 몇 가지 접근방법으로 세포 사멸을 결정한다.

  • 방사성 방법: 대상 세포는 CDC 검사 전에 Cr로 라벨을 표시하며, 세포 투석 중에 크롬이 방출되고 방사능 양이 측정된다.[6][7]
  • 살아있는 세포의 대사 활성도 측정(생존 세포 얼룩): 항체 및 보약과 함께 대상 세포를 배양한 후 혈장막-permeable 염료(예: 칼세인-AM[7][8] 또는 레사주린[6][9])를 첨가한다.살아있는 세포는 그것을 유량 세포측정법으로 감지할 수 있는 불침투성 형광물질로 대사한다.이 제품은 신진대사가 활발하지 않은 죽은 세포에서 형성될 수 없다.
  • 방출된 세포내 효소의 활성도 측정: 죽은 세포 방출 효소(예: LDH 또는 GAPDH)[6]와 그 기질을 첨가하면 색 변화가 일어나는데, 이는 보통 흡광도나 발광성의 변화로 정량화된다.
  • 죽은 세포의 얼룩: (형광) 염료가 손상된 혈장막을 통해 죽은 세포 안으로 들어간다.예를 들어 요오드화 프로피듐은 죽은 세포의 DNA에 결합되고 형광 신호는 흐름 세포계에 의해 측정된다.[6]

HLA 타이핑 및 교차 일치 테스트

CDC 검사는 장기 또는 골수 이식에 적합한 기증자, 즉 조직적합성 시스템 HLA의 표현형을 가진 기증자를 찾는 데 사용된다.[10]처음에 HLA 타이핑은 환자와 기증자의 HLA 표현형을 결정하기 위해 이루어진다.잠재적으로 적합한 부부가 발견되면 이식 거부반응을 일으킬 수 있는 기증자 특유의 항HLA 항체를 환자가 생성하는 것을 배제하기 위해 교차매치 검사를 실시한다.

CDC 형태의 HLA 타이핑(다른 말로 세롤릭 타이핑)은 특성화된 동종 항균 또는 단클론 항체의 HLA 항체 배치를 사용한다.이 항체들은 환자나 기증자의 림프구와 보완의 원천으로 하나씩 배양된다.죽은 세포의 양(따라서 양성 결과)은 죽은 세포나 살아있는 세포에 의해 측정된다.오늘날 CDC 타이핑은 PCR을 통해 HLA 분자의 뉴클레오티드 시퀀스를 식별할 수 있는 분자 타이핑으로 대체되고 있다.[10]

CDC 검사는 일반적으로 교차 일치 테스트를 수행하는 데 사용된다.기본 버전은 기증자의 림프구와 함께 환자 혈청을 배양하고 토끼보충제를 추가한 뒤 두 번째 배양하는 내용을 담고 있다.죽은 세포가 있다는 것은 기증자가 이 특정 환자에게 적합하지 않다는 것을 의미한다.최소 배양 시간 연장, 항인간 글로불린(AHG), 결합되지 않은 항체 제거, T세포 분리, B세포 부분집합 등 시험 민감도를 높이기 위한 수정이 가능하다.CDC 교차매치 외에도 유동-기압 교차매치를 사용할 수 있으며, 이는 더욱 민감하고 심지어 비활성 항체도 감지할 수 있다.[11]

참고 항목

참조

  1. ^ Schroeder, Harry W.; Cavacini, Lisa (2010). "Structure and function of immunoglobulins". Journal of Allergy and Clinical Immunology. 2010 Primer on Allergic and Immunologic Diseases. 125 (2, Supplement 2): S41–S52. doi:10.1016/j.jaci.2009.09.046. ISSN 0091-6749. PMC 3670108. PMID 20176268.
  2. ^ B-세포 림프종을 위한 리툭시맵의 작용 메커니즘에서의 보완 역할:치료에 대한 시사점.저우 2008
  3. ^ 면역 유발 글리칸 커플링에 의해 치료용 항체 파편의 의존성 세포독성 활성을 보완한다.웨이백 머신에 보관된 2016-04-09
  4. ^ Meyer, Saskia; Leusen, Jeanette HW; Boross, Peter (2014). "Regulation of complement and modulation of its activity in monoclonal antibody therapy of cancer". mAbs. 6 (5): 1133–1144. doi:10.4161/mabs.29670. ISSN 1942-0862. PMC 4622586. PMID 25517299.
  5. ^ Wang, Xinhua; Mathieu, Mary; Brezski, Randall J. (2018). "IgG Fc engineering to modulate antibody effector functions". Protein & Cell. 9 (1): 63–73. doi:10.1007/s13238-017-0473-8. ISSN 1674-800X. PMC 5777978. PMID 28986820.
  6. ^ a b c d Taylor, Ronald P.; Lindorfer, Margaret A. (2014). "The role of complement in mAb-based therapies of cancer". Methods. 65 (1): 18–27. doi:10.1016/j.ymeth.2013.07.027. ISSN 1095-9130. PMID 23886909.
  7. ^ a b Hernandez, Axel; Parmentier, Julie; Wang, Youzhen; Cheng, Jane; Bornstein, Gadi Gazit (2012). "Monoclonal antibody lead characterization: in vitro and in vivo methods". Antibody Engineering. Methods in Molecular Biology. Vol. 907. pp. 557–594. doi:10.1007/978-1-61779-974-7_32. ISBN 978-1-61779-973-0. ISSN 1940-6029. PMID 22907374.
  8. ^ Gillissen, M.A.; Yasuda, E.; de Jong, G.; Levie, S.E.; Go, D.; Spits, H.; van Helden, P.M.; Hazenberg, M.D. (2016). "The modified FACS calcein AM retention assay: A high throughput flow cytometer based method to measure cytotoxicity". Journal of Immunological Methods. 434: 16–23. doi:10.1016/j.jim.2016.04.002. PMID 27084117.
  9. ^ Gazzano-Santoro, Hélène; Ralph, Peter; Ryskamp, Thomas C; Chen, Anthony B; Mukku, Venkat R (1997). "A non-radioactive complement-dependent cytotoxicity assay for anti-CD20 monoclonal antibody". Journal of Immunological Methods. 202 (2): 163–171. doi:10.1016/S0022-1759(97)00002-1. PMID 9107305.
  10. ^ a b Gautreaux, Michael D. (2017), Orlando, Giuseppe; Remuzzi, Giuseppe; Williams, David F. (eds.), "Chapter 17 - Histocompatibility Testing in the Transplant Setting", Kidney Transplantation, Bioengineering and Regeneration, Academic Press: 223–234, doi:10.1016/B978-0-12-801734-0.00017-5, ISBN 9780128017340, retrieved 2019-08-30
  11. ^ Guillaume, Nicolas (2018). "Improved flow cytometry crossmatching in kidney transplantation". HLA. 92 (6): 375–383. doi:10.1111/tan.13403. ISSN 2059-2310. PMID 30270577.