DAPI
DAPI | |
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| 이름 | |
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| IUPAC 이름 2-(4-아미디노페닐)-1H-indole-6-카복사미딘 | |
| 기타 이름 4′,6-다이아미디노-2-페닐린돌레 | |
| 식별자 | |
3D 모델(JSmol) | |
| 체비 | |
| 켐벨 | |
| 켐스파이더 | |
펍켐 CID | |
CompTox 대시보드 (EPA) | |
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| 특성. | |
| C16H15N5 | |
| 어금질량 | 277.331 g·2011−1 |
달리 명시된 경우를 제외하고, 표준 상태(25°C [77°F], 100 kPa)의 재료에 대한 데이터가 제공된다. | |
 이버라이시  (?) | |
| Infobox 참조 자료 | |
DAPPI('DAPPY', /ˈdæpiː/로 발음됨) 또는 4′6-다이아미디노-2-페닐린돌은 DNA에서 아데닌-시민이 풍부한 부위에 강하게 결합되는 형광 얼룩이다. 그것은 형광 현미경 검사에서 광범위하게 사용된다. DAPI는 손상되지 않은 세포막을 통과할 수 있기 때문에 살아있는 세포에서 그 막을 덜 효율적으로 통과하므로 막 생존성을 위한 마커를 제공하지만 살아있는 세포와 고정된 세포 모두를 착색하는 데 사용할 수 있다.
역사
DAPI는 트라이파노소미아증을 치료하기 위한 약물을 찾기 위한 조사의 일환으로 1971년 오토 댄의 실험실에서 처음 합성되었다. 비록 약물로써 성공하지는 못했지만, 추가 조사 결과 DNA에 강하게 결합되어 묶였을 때 형광성이 더 강해진 것으로 나타났다. 이는 1975년 초경밀화에서 미토콘드리아 DNA를 식별하는 데 사용되었는데, 이는 DAPI를 형광 DNA 얼룩으로 사용한 최초의 기록이다.[1]
DNA에 묶였을 때의 강한 형광은 형광 현미경 검사를 위해 DNA의 형광 얼룩을 위한 DAPI의 빠른 채택으로 이어졌다. 1970년대 후반에는 식물, 메타조아, 박테리아 세포 및 바이러스 입자의 DNA 검출에 사용되었고, 1977년에는 세포 내부의 DNA 정량적 얼룩이 입증되었다. DAPI를 플로우 시토메트리의 DNA 얼룩으로 사용하는 것도 이 무렵에 입증되었다.[1]
형광 특성
이중 가닥 DNA에 묶여 있을 때 DAPI는 파장 358nm(초자외선)에서 최대 흡수량을 가지며, 최대 방출량은 461nm(파란색)이다. 따라서 형광 현미경 검사의 경우 DAPI는 자외선으로 흥분하며 파란색/사이안 필터를 통해 검출된다. 배출 피크는 꽤 넓다.[2] DAPI는 또한 RNA와 결합할 것이다, 비록 그것이 강한 형광은 아니지만. 그것의 방출은 RNA에 묶였을 때 약 500 nm로 변화한다.[3][4]
DAPI의 파란색 방출은 한 표본에 여러 개의 형광 얼룩을 사용하고자 하는 현미경 검사자들에게 편리하다. DAPI와 형광소자, 녹색 형광 단백질(GFP) 등 녹색 형광 분자 사이에 형광이 일부 겹치지만 그 효과는 미미하다. 초정밀 영상 분석이 필요한 경우 스펙트럼 Unmixing을 사용하면 이 효과를 설명할 수 있다.
분석 형광 현미경 DAPI 외에서도 마이코플라스마나 바이러스를 오염시키는 DNA를 검출하기 위해 세포 배양균에 라벨을 붙이는 것이 인기다. DAPI로 얼룩진 생장 매개체 형광물질에 마이코플라스마나 바이러스 입자로 표기해 쉽게 검출할 수 있도록 했다.[5]
흡수 및 형광 특성 모델링
이 DNA 형광 탐침은 시간 의존적 밀도 기능 이론을 사용하여 효과적으로 모델링되었으며[6], 편광 가능 연속체 모델의 IEF 버전과 결합되었다. 이러한 양자-기계 모델링은 구조적 유연성과 양극화 감소라는 관점에서 DNA 포켓의 미세한 홈 결합과 상호교정에 의해 주어지는 흡수 및 형광 거동을 합리화했다.
살아있는 세포와 독성
DAPI는 고정된 셀 얼룩에 사용될 수 있다. 살아있는 세포의 얼룩에 필요한 DAPI의 농도는 일반적으로 매우 높다; 살아있는 세포에는 거의 사용되지 않는다.[7] MSDS에는[8] 독성이 없으며 대장균에 대한 돌연변이 유발성이 없는 것으로 나타나지는 않았지만 제조업체 정보에 알려진 돌연변이 물질로 표시된다.[9][2] 작은 DNA 결합 화합물인 만큼 발암성 효과가 있을 가능성이 높으며 취급과 처분에 주의해야 한다.
대안
회흐스트 얼룩은 또한 DAPI와 동일한 장비 필터 설정을 사용하여 볼 수 있을 뿐만 아니라 라이브 셀과 고정 셀 애플리케이션 모두에 호환되는 청색 형광 DNA 얼룩이라는 점에서 DAPI와 유사하다.
참조
- ^ a b Kapuscinski, J. (September 1995). "DAPI: a DNA-specific fluorescent probe". Biotech. Histochem. 70 (5): 220–233. doi:10.3109/10520299509108199. PMID 8580206.
- ^ a b 인비트로겐, DAPI 핵산 착색 2009-03-06 웨이백 머신에 보관. 2009-12-08.
- ^ DAPI의 스콧 프랄이 2009-12-08에 접속했다.
- ^ Kapuscinski, J (2017). "Interactions of nucleic acids with fluorescent dyes: spectral properties of condensed complexes". Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 38 (9): 1323–1329. doi:10.1177/38.9.1696951. PMID 1696951.
- ^ Russell, W. C.; Newman, Carol; Williamson, D. H. (1975). "A simple cytochemical technique for demonstration of DNA in cells infected with mycoplasmas and viruses". Nature. 253 (5491): 461–462. Bibcode:1975Natur.253..461R. doi:10.1038/253461a0. PMID 46112. S2CID 25224870.
- ^ Biancardi, Alessandro; Biver, Tarita; Secco, Fernando; Mennucci, Benedetta (2013). "An investigation of the photophysical properties of minor groove bound and intercalated DAPI through quantum-mechanical and spectroscopic tools". Phys. Chem. Chem. Phys. 15 (13): 4596–603. Bibcode:2013PCCP...15.4596B. doi:10.1039/C3CP44058C. PMID 23423468.
- ^ Zink D, Sadoni N, Stelzer E (2003). "Visualizing Chromatin and Chromosomes in Living Cells. Usually for the live cells staining Hoechst Staining is used. DAPI gives a higher signal in the fixed cells compare to Hoechst Stain but in the live cells Hoechst Stain is used". Methods. 29 (1): 42–50. doi:10.1016/S1046-2023(02)00289-X. PMID 12543070.
- ^ DAPI 물질 안전 데이터 시트. kpl.com
- ^ Ohta T, Tokishita S, Yamagata H (2001). "Ethidium bromide and SYBR Green I enhance the genotoxicity of UV-irradiation and chemical mutagens in E. coli". Mutat. Res. 492 (1–2): 91–7. doi:10.1016/S1383-5718(01)00155-3. PMID 11377248.
참고 항목
 | 위키미디어 커먼즈에는 DAPI와 관련된 미디어가 있다. |
