펄스 체이스 분석

Pulse-chase analysis
아라비도시스탈리아나 야생형 및 axr2-1 돌연변이에서의 옥신 신호 전달의 펄스 체이스 해석.야생형 및 axr2-1 묘목은 35S-메티오닌으로 라벨링되었으며, AXR2/axr2-1 단백질은 라벨링 기간 직후(t = 0) 또는 라벨링되지 않은 메티오닌으로 15분간 추적한 후(t = 15) 면역 침강되었다.

생화학 및 분자생물학에서 펄스 체이스 분석은 세포들을 연속적으로 라벨이 부착된 화합물(펄스)에 노광하고 나서 라벨이 부착되지 않은 형태(체이스)[1]로 동일한 화합물에 노광함으로써 시간이 지남에 따라 일어나는 세포과정을 검사하는 방법이다.

메커니즘

선택된 세포 또는 세포군은 우선 연구 대상 분자 또는 시스템에 통합되는 라벨 부착 화합물(펄스)에 노출된다(펄스 라벨링 참조).그런 다음 이 화합물은 대사 경로를 거쳐 연구된 제품의 합성에 사용된다.예를 들어 방사성 표지의 류신(H-류신)3을 췌장 베타세포군에 공급할 수 있으며, 췌장 베타세포군은 인슐린 합성에 이 아미노산을 사용한다.

라벨 부착 화합물(보통 약 5분, 그러나 실제 소요 시간은 연구 대상에 따라 다름)의 도입 직후, 동일하지만 라벨 부착되지 않은 물질(추적)이 환경에 도입된다.앞의 예와 같이 인슐린의 생산은 계속되지만, 펄스 단계에서 도입된 방사성 류신은 더 이상 포함되어 있지 않으며, 방사성 검출 방법으로는 보이지 않는다.그러나 펄스 기간 동안 생성된 라벨이 부착된 인슐린의 움직임은 여전히 [2]세포 내에서 추적될 수 있다.

사용하다

이 방법은 장기간에 걸친 특정 세포의 활동을 결정하는 데 유용합니다.이 방법은 단백질 키나제 C, 유비퀴틴, 그리고 많은 다른 단백질들을 연구하는데 사용되어 왔다.이 방법은 오카자키 조각의 존재와 기능을 증명하는 데도 사용되었다.조지 팰레이드는 분비 [3][4]경로를 설명하기 위해 방사성 아미노산의 펄스 체이스를 사용했다.

레퍼런스

  1. ^ Takahashi M, Ono Y (2003). "Pulse-chase analysis of protein kinase C". Methods Mol. Biol. 233: 163–70. doi:10.1385/1-59259-397-6:163. ISBN 978-1-59259-397-2. PMID 12840506.
  2. ^ Ferguson PL, Coombs DH (March 2000). "Pulse-chase analysis of the in vivo assembly of the bacteriophage T4 tail". J. Mol. Biol. 297 (1): 99–117. doi:10.1006/jmbi.2000.3551. PMID 10704310.
  3. ^ Hoyt MA, Zich J, Takeuchi J, Zhang M, Govaerts C, Coffino P (April 2006). "Glycine-alanine repeats impair proper substrate unfolding by the proteasome". EMBO J. 25 (8): 1720–9. doi:10.1038/sj.emboj.7601058. PMC 1440830. PMID 16601692. Figures and tables — showing Pulse-Chase Analysis {{cite journal}}:외부 링크 quote=(도움말)
  4. ^ Alberts, B. (March 2002). Molecular Biology of the Cell, Fourth Edition. ISBN 978-0-8153-3218-3.


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