터치다운 폴리머아제 체인 반응

터치다운 중합효소 체인 반응 또는 터치다운 방식의 중합효소 체인 반응은 프라이머가 비특정 시퀀스를 증폭하는 것을 피하는 중합효소 체인 반응 방법이다.^[1]중합효소 연쇄반응 중 아닐링 온도는 프라이머 아닐링의 특수성을 결정한다.프라이머의 용해점은 어닐링 온도의 상한을 설정한다.이 지점 바로 위의 온도에서는 프라이머와 템플릿 사이의 매우 구체적인 베이스 페어링만 발생한다.낮은 온도에서 프라이머는 덜 구체적으로 결합한다.비특정 프라이머 결합은 폴리머아제 연쇄 반응 결과를 모호하게 하는데, 이는 증폭 초기 단계에서 프라이머가 특정 시퀀스를 "스왑 아웃"하는 비특정 시퀀스가 폴리머아제 증폭의 지수적 특성 때문이다.^[2]

방법

터치다운 PCR의 구성.프라이머와 DNA 사이의 첫 번째 어닐링은 초기 온도에서 발생하며, 두 번째 ${\displaystyle \mathrm{어닐링}}$은 온도가 $\Delta {\displaystyle \mathrm{}}$T {\$displaystyle$ \$Delta$ T$}$에 의해 낮아진 후 두 ${\displaystyle {\mathrm{번째}}^{}}$ 어닐링 제품은 $2{\displaystyle {\mathrm{}}^{}}$- 1 ${\$의 불이익을 받는다$.$

터치다운 폴리머아제 연쇄 반응 주기의 초기 단계는 높은 어닐링 온도를 가진다.어닐링 온도는 후속 사이클 집합마다 증분 감소한다.프라이머는 견딜 수 있는 비특정 결합의 최소 허용 온도인 최고 온도에서 미늘을 제거한다.따라서, 증폭된 첫 번째 시퀀스는 가장 큰 프라이머 특수성의 영역 사이의 시퀀스로서, 이것이 관심의 순서일 가능성이 가장 높다.이 파편들은 낮은 온도에서 후속 라운드 동안 더욱 증폭될 것이며, 프라이머가 낮은 온도에서 결합할 수 있는 비특정 시퀀스보다 경쟁할 것이다.초기에 (고온 단계 중) 프라이머가 관심 순서에 결합되는 경우, 제품에 대한 후속 폴리머아제 연쇄 반응을 수행하여 해당 파편을 더욱 증폭시킬 수 있다.터치다운은 높은 온도에서 반응의 특수성을 높이고 어닐링 온도를 낮추어 끝부분을 향한 효율성을 높인다.^[3]

수학적 관점에서 더 작은 온도에서 어닐링하는 제품은 사이클 $i{\displaystyle }$ ${\displaystyle i}$의 첫 번째 어닐링에 대해$$ ${\displaystyle 2^{}}$ ${\displaystyle i^{}}$- j ${\$ $j$$}$이(가) 불이익을 받고,$$$사이클$ j {\$displaysty$ $j$$}$의 두 번째 제품은 i${\displaystyle ,}$ $j$∈ N$, i \$ ${\displaystyle j\mathbb{}}$ ${\mathb$ {$N$},$i-geq$ j$\}.$

참조